Q
细胞生长缓慢
可能原因:
-
培养液及培养方法有误;更换不同培养液或血清也可能导致生长缓慢。
-
培养液中一些细胞生长必须成分如生长因子耗尽或缺乏。
-
培养物中有少量细菌或真菌污染;
-
接种细胞起始浓度太低;
-
细胞老化;
-
支原体污染。
解决方法
-
检查培养液和培养方法是否正确,比较新培养液与原培养液成分,让细胞逐渐适应新培养液;
-
换入新鲜配置培养液,或补加生长因子;
-
用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物;
-
增加接种细胞起始浓度;
-
换用新的保种细胞;
-
分离培养物,检测支原体,如发现支原体污染,丢弃培养物。
Q
细胞不贴壁生长
可能原因:
-
支原体污染。
-
培养瓶瓶底不干bai净。
-
培养液pH 值过碱(NaHCO3 分解)。
-
消化du液或培养液配制错误、过期储存、储存不当。
-
细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)。
-
接种细胞起始浓度太低或太高。
解决方法:
-
缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度.
-
分离培养物,检测支原体.清洁支架和培养箱.如发现支原体污染,丢弃培养物.
-
注意刷洗,或换用一次性塑料培养瓶.
-
使用无菌醋酸溶液调整pH 值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可).
-
重新配置消化液或培养液.
-
启用新的保种细胞.
-
调节最佳接种细胞浓度.
Q
培养细胞死亡
可能原因:
-
培养箱内无CO2;
-
培养箱内温度波动太大;
-
细胞冻存或复苏过程中损伤;
-
培养液渗透压不正确;
-
培养液中有毒代谢产物堆积。
解决方法:
-
检测培养箱内CO2;
-
检查培养箱内温度;
-
取新的保存细胞种;
-
检测培养液渗透压;
-
换入新鲜培养液。